如何進行細胞染色
I.細胞的染色例
1. 染色例1
以染色HeLa細胞為例，介紹使用如下試劑的方法
1）. 試劑溶液的配制
配制以下的儲備液
Calcein-AM 0.5 mg/ml DMSO solution
BCECF-AM 1 mmol/l DMSO solution
CFSE 1 mg/ml DMSO solution
CytoRed 1 mmol/l DMSO solution
FDA 0.5 mg/ml DMSO solution
PI 1 mg/ml H2O solution
EB 1 mg/ml H2O solution
DAPI 1 mg/ml H2O solution
AO 1 mg/ml H2O solution
* DMSO solution在
2）. 器具
蓋玻片 18 mm × 18 mm
培養皿 （直徑約35 mm）
鑷子
3）. 操作
1） 用5.0 ml PBS（-）溶解10 μl儲備液，配制成染色液。
*由于用DMSO溶解的儲備液在水溶液中易分解，所以染
色液要現配現用，放置長時間后不能染色。
2） HeLa細胞用Trypsin-EDTA制成細胞懸液。
3） 將細胞懸液離心分離（速度: 1,000 rpm，時間: 3分鐘）。
4） 去除上清液，加入PBS（-），控制細胞數量在105-106 個/ml。
5） 用移液槍吹打充分。
6） 在1.5ml微管中加入30 μl第4） 步得到的細胞懸液。
7） 加入15 μl染色液。
8） 蓋上蓋子，在
9） 取10 μl第8） 步的染色溶液滴加在蓋玻片上， 上面再覆蓋
另一張蓋玻片。
10） 將蓋玻片放在熒光顯微鏡下，用染色試劑對應的激發波
長觀察。
2. 染色例2
以MitoRed染色細胞為例，介紹使用如下試劑的方法
1）.試劑溶液的配制
配制以下的儲備液
MitoRed 1 mmol/l DMSO solution
（用78 μl DMSO溶解1支50 μg的MitoRed）
*DMSO solution在
2）. 操作
1） 用培養基稀釋1 mmol/l 儲備液。MitoRed終濃度為：20-
200 nmol/l
*加入到細胞前，推薦先在
2） 在細胞培養板上培養細胞 （細胞濃度：1×105- 1×106個
/ml）。
3） 去除培養基，用 （培養基：PBS，Hank,s溶液等）輕輕
地清洗。
4） 將稀釋的試劑溶液添加至每孔，在培養條件下，培養
30-60分鐘。
5） 去除含色素溶液的培養基，添加新的培養基。
6） 用熒光顯微鏡觀察。
固定細胞的時候，在第4） 步的操作后按以下步驟操作。
5） 去除MitoRed溶液，用不含血清的培養基， PBS，
Hank,s溶液清洗。
6） 用10%中性 福爾馬林緩沖液，固定15-20分鐘。
7） 用PBS清洗。
8） 用熒光顯微鏡觀察。
圖P-7-1 j） 染色HeLa細胞的熒光圖像。
3. 染色例3
介紹以Hochest 33258,33342染色細胞為例
1）. 試劑溶液的配制
配制以下的儲備液
Hochest 33258 1 mg/ml H2O solution
Hochest 33342 1 mg/ml H2O solution
細胞固定液：1%戊二醛/PBS（-）
培養液：PBS（-）
2）. 操作
1） 將含約1×106個細胞的細胞培養基離心5分鐘
（速度：400 x ），去除上清液。
2） 加入100 μl細胞固定液，采用吹打等方法，充分混合。
3） 在室溫下靜置30分鐘。
4） 離心5分鐘 （速度：400 x ），去除上清液。加入1 ml
PBS（-）混合后，再離心5分鐘 （速度：400 x ）。
*此操作為了充分清洗掉戊二醛，如果存在戊二醛，會導致淬滅。
5） 加入20 μl PBS （-），混合后加入4 μl熒光色素，再混合。
6） 滴1滴細胞染色液在載玻片上，將蓋玻片蓋在上面。
7） 用熒光顯微鏡觀察。
圖P-7-1 k）、I）染色正常人胎兒細胞的熒光圖像。
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